BALANDRAUD Nathalie

ORCID ID 0000-0002-3839-0185

• L’objectif de notre projet est de tester l’hypothèse du modèle de physiopathologie de la PR dit hapten-carrier. Ce modèle est basé sur les éléments suivants 1/ Le Lymphocyte B (LB) est la cellule présentatrice d’antigène 2/ Le LB avec une IgM de surface spécifique de la citrulline va accrocher  le couple protéine citrullinée - l’enzyme qui citrulline, cad la Peptidiyl arginine désiminase PAD4 3/ Le couple est dégradé en peptides et est processé à la surface du LB par  une molécule HLA-DR.  4/ Si HLA-DR contient l’épitope partagé de susceptibilité à la PR, il est capable de présenter les peptides de PAD4 au LT.  5/ Le LT reconnait  le couple HLA-DR et  son peptide de PAD4 comme étranger.   6/ Le LT s’active et devient un LT helper qui va activer en retour le LB.  7/ Le LB spécifique de la citrulline, va se différencier en Plasmocyte sécrétant des IgG anti citrulline ( ACPA) .
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• Nous avions 3 hypothèses 
• 1/ Si l’hypothèse hapten-carrier est vraie, alors le risque de développer la PR est corrélé à la capacité pour un allèle HLA-DR (contenant l’épitope partagé ou non) de fixer un ou des  peptides de PAD et non à la capacité pour un allèle HLA-DR (contenant l’épitope partagé ou non) de fixer un ou des  peptides du fibrinogène citrulliné. Nous montrons qu’il n’y a aucune corrélation entre la fixation des peptides de fibrinogène, citrulliné ou non, avec le risque de développer une PR. En revanche, il existe une très bonne corrélation entre la fixation de peptides de PAD et le risque de développer la PR.
• Publication :
• Balandraud N, Auger I, Roudier J. Do RA associated HLA-DR molecules bind citrullinated peptides or peptides from PAD4 to help the development of RA specific antibodies to citrullinated proteins? J. Autoimmun. 2021 Jan;116:102542. 
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• 2/ Si l’hypothèse hapten-carrier est vraie, les PBMC de patients PR doivent proliférer en présence des protéines PAD humaines (en particulier PAD2 et PAD 4), et cette prolifération doit être associée à la production d’AC anti PAD et d’ACPA.
• Etape 1 Nous avons analysé en culture LT (analyse en BrDU) la prolifération lymphocytaire T contre PAD4et 11 peptides de PAD4 qui fixent bien HLA-DRB1*04 :01 HLA-DRB1*04 :04 (associés au risque de PR)   chez 41 patients PR et 36 contrôles. 
• Résultats : l’association d’une lymphoprolifération T contre PAD 4 et des Ac anti PAD4 est spécifique de la PR. De plus nous avons montré que la prolifération LT contre un peptide de PAD4, nommé p8, est associée de façon spécifique à la PR, aux ACPA et à l’épitope partagé
• Brevet : Jean Roudier, I Auger, N Balandraud, N°EP19305265.1).  
• Publication
• Auger I*, Balandraud N*, et al. Peptidylarginine Deiminase Autoimmunity and the Development of Anti-Citrullinated Protein Antibody in Rheumatoid Arthritis: The Hapten-Carrier Model. Arthritis Rheumatol. 2020 Jun;72(6):903-911. * First co autors
• Etape 2  Nous avons analysé en culture LT (analyse en BrDU) la prolifération lymphocytaire T contre PAD2 chez 70 patients PR et 30 contrôles. Nous montrons que la réponse à PAD 2 n’est pas spécifique de la PR. Les patients souffrant de rhumatisme psoriasique en particulier ont une prolifération contre PAD2. 
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• Etape 3  Analyses  en Cytométrie en Flux pour confirmer les données, analyser le type de réponse T et tester d’autres peptides de PAD4.
• Nous avons commencé par la mise en place de la technique sur sang total
• Publication*
• Cartagena García C, Balandraud N, Roudier J, Lafforgue P, Lambert N, Busnel JM . Leveraging whole blood based functional flow cytometry assays to open new perspectives for rheumatoid arthritis translational research. Sci Rep. 2022 Jul 16;12(1):12166. 
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• Puis nous avons déjà testé 20 patients souffrant PR et 10 rhumatisme Psoriasique suivis avant et après mise en place de leur traitement. Nous avons fait des analyses par pool de 10 peptides afin de sélectionner un pool de peptides d’intérêt et décider in fine si nous devons envisager une analyse des LT après stimulation par des peptides de PAD4 ou par la protéine PAD4  entière.  Ce travail nous a permis de confirmer que le peptide P8 est un activateur des LT dans la PR, et qu’il reste très  intéressant de tester PAD4 entière. Article en préparation.
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• Nous allons maintenant procéder a la caractérisation plus fine des LT activés par PAD4. 
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• Pour continuer ce projet nous allons tester ce modèle de réponse à PAD 4 comme un facteur prédicitif d’évolution vers la PR dans une cohorte de 100 patients souffrant d’une PRE PR  ( Colaboration nationale protocole PROMESS  dirigé par le Pr Claire Daien   )